Учет интенсивности роста тест-культур производят на электроколориметре (нефелометре), на котором ноль устанавливают с кюветами, заполненными средой Ридер без испытуемого витамина, но засеянной тест-культурой или соответствующими разведениями испытуемой жидкости (если она имеет окраску).
Показания ФЭК (оптическую плотность) записывают в заранее разграфленные таблицы, по каждому витамину отдельно (табл. 49).

Таблица 49
Содержание витамина в пробирках устанавливают, сравнивая величину показаний ФЭК (оптической плотности) с его показаниями при добавлении в среду onpel-деленных количеств данного витамина. При сравнении используют стандартную кривую.
Количество витамина в 1 мл жидкости вычисляют умножением количества витамина в пробирке на разведение испытуемой жидкости.
Метод определения витамина В12 в микробных клетках. Метод определения витамина Bi2 описан СМ. Чайковской и Е. Н. Дружининой (1957). Он основан на использовании весьма чувствительного к наличию в среде витамина'B!2 индикаторного организма Escherichia coli, штамм 113-3. Этот штамм хранят в лабораторных условиях на среде: пептон — 20 г, NaCl — 5 г, агар —18 г, дистиллированная вода—-1 л; рН 7,0. Перед употреблением (за сутки) хранившуюся культуру Е. coli пересевают в пробирки на свежеприготовленную питательную среду того же состава.
В качестве основной среды при анализе используют среду № 4, состоящую из NH4C1 — 2 г, NaCl — 3, К2НРО4 — 0,4, лимоннокислого натрия — 3, лактозы —3, глюкозы — 10, агара — 20 г на 1 л; рН среды 7,0. Стерилизация при 0,5 атм в течение 15 минут. Среду № 4 разливают в колбы по 100—200 мл.
Перед исследованием образец подготавливают. Для этого изучаемые микроорганизмы выращивают в чашках Петри на поверхности агаровой среды, затем клетки собирают шпателем и высушивают при температуре 45° в сушильном шкафу. На аналитических весах делают навески сухих клеток (около 25 мг каждая) и переносят в 1:%ный раствор лимоннокислого натрия, разлитый в пробирки по 5 мл. Перед стерилизацией в каждую npoi-бирку добавляют по 0,5 мл 5%-ного раствора нитрита натрия. Стерилизуют при 0,5 атм в течение 15 минут.
В результате такой обработки клеток витамин B,i2 освобождается от белкового комплекса и переходит в раствор. Определение количества витамина В!2 в микробных клетках состоит в следующем. Основную среду № 4 расплавляют на водяной бане и охлаждают до 50°, после чего на 100 мл среды вносят 1,5—2,0 млрд. клеток Е. coli 113-3, смытых с агаровых косяков. Концентрацию взвеси устанавливают по бактериальному стандарту.
Среду с внесенной тест-культурой разливают в чашки Петри с ровным дном, примерно по 15 мл в каждую. После застывания агара на его поверхности расставляют цилиндрики (по 4—6 шт. на каждую чашку), в которые капают разные концентрации испытуемых вытяжек по 0,1 мл без разведения и разведенные 1 :2 и 1:4.
Для сравнения в 2 цилиндрика на этой же чашке закапывают по 0,1 мл стандартного раствора витамина В12 в концентрации 0,05 мкг на 1 мл. Стандартный раствор получают разведением содержащегося в ампуле (аптечная упаковка) исходного раствора 1%-ным раствором лимоннокислого натрия до концентрации 1 мкг на 1 мл. Этот раствор разводят до концентрации 0,05 мкг на 1 мл. Жидкость из цилиндриков диффундирует в агар, и при наличии в ней витамина В12 в зоне диффузии появляется рост тест-культуры. Диаметр зон роста Е. coli вокруг цилиндриков пропорционален

Таблица 50