Ферментный гидролиз для определения пантотеновой кислоты проводят так: навеску сухих клеток заливают водой и ставят на 10 минут на водяную баню (рН 7). После этого для выделения пантотеновой кислоты из связанного состояния клетки обрабатывают препаратом протеазы гриба Aspergillus terricola или же используют сухой мицелий Aspergillus oryzae.
Гидролизат для определения никотиновой кислоты получают из навески сухих клеток 0,1—0,5 г, которую заливают 10—20 мл 0,1 н. НС1 и нагревают в автоклаве при давлении 1 атм в течение 20 минут. Полученный гидролизат нейтрализуют в мерной колбе 0,1 н. щелочью до рН 5,5—6,0, фильтруют через бумажный фильтр и разводят водой до нужной концентрации (примерно 1 г на 1—5 л воды).
Гидролизат для определения б истин а приготовляют так: навеску сухих клеток 0,1—0,3 г растирают и заливают 10 мл 6 н. H2SO4 и гидролизуют в автоклаве в течение часа при давлении 1 атм. После этого нейтрализуют в мерной колбе 6 н. NaOH до рН 5—6, доливают водой до метки, фильтруют, разводят водой примерно из расчета 1 г сухих клеток на 1—6 л воды.
Разведение исследуемого материала. Способность разных микроорганизмов к биосинтезу витаминов неодинакова. Содержание витаминов в тех или иных субстратах также различно, поэтому нельзя установить для них общих оптимальных разведений исследуемого материала. Оптимальными разведениями считаются те, которые могут быть сравнимы с количествами чистых витаминов, взятых для построения стандартных кривых. Например, для Мус. phlei эти разведения оказались следующими.
Для каждого образца берут ряд из 6—8 пробирок с последовательными разведениями, часть из которых можно будет сравнивать с показаниями шкалы, или проводят предварительное, ориентировочное исследование с целью подбора разведений.
Получение стандартных кривых. Стандартная шкала (кривая) нужна для того, чтобы сравнивать рост тест-культур в пробирках шкалы, содержащих известные количества витамина, с ростом тест-культур в пробирках, содержащих в качестве источника витамина испытуемый материал. Одинаковый рост указывает на то, что в пробирках содержится одинаковое количество витамина. Стандартная кривая строится на основании данных по размножению тест-культуры в пробирках шкалы, в- которые к основной среде Ридер добавлены разные количества определяемого витамина. Интенсивность роста тест-культуры в пробирках определяется по мутности, которая измеряется в единицах оптической плотности на фотоэлектронефелометре или фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром (работают на правом барабане) . В качестве примера оптическая плотность с разбавленным стандартным раствором РР при учете на ФЭК-М приведена в табл. 47.
Тогда стандартная кривая (построенная по данным табл. 47) для определения количества никотиновой кислоты будет следующая
(рис. 20).

Таблица 47
Для каждого витамина строится своя стандартная кривая. Чтобы приготовить шкалу, нужно иметь рабочие растворы витаминов. Они готовятся следующим образом. Берут навески витаминов в несколько миллиграммов, растворяют их в дистиллированной воде с таким расчетом, чтобы в 1 мл раствора содержался 1 мг витамина. Эти стандартные растворы разводят и получают рабочие растворы (табл. 48).

Таблица 48