Качественный метод определения способности микроорганизмов синтезировать некоторые витамины (метод наложения блоков). Изучаемые микроорганизмы насевают сплошным газоном на поверхность агаровой среды, разлитой в чашки Петри. Используют синтетические среды, не содержащие витаминов. Если изучаемые культуры неспособны использовать минеральный азот, то к синтетической среде добавляют набор аминокислот (по 20 мг на 1 л каждой) или безвитаминный гидролизат казеина. Культуры выращивают в термостате в течение 5—7 суток. За это время в агаре накапливаются продукты обмена микроорганизмов, в том числе синтезируемые ими витамины. По истечении срока из агара с выросшей культурой вырезают блоки пробочным сверлом или иным способом и раскладывают их в чашки Петри на агаровую среду Ридер с добавлением к ней витаминов (с учетом потребности в них данного тест-организма), кроме определяемого. Предварительно поверхность среды Ридер засевают индикаторной культурой, пассированной на без витаминной среде. Для контроля в те же чашки раскладывают агаровые блоки, вырезанные из незасеянной среды, на которой выращивался микроорганизм.
Результаты учитывают по росту тест-культуры вокруг блока. Он возможен только в том случае, если из блока в окружающую среду диффундировал витамин, необходимый для развития данного тест-организма.

Рис. 19. Интенсивность роста тест-культуры в зависимости от количества витамина, диффундировавшего в среду.
Интенсивность роста индикаторных организмов вокруг блоков учитывают по трехбалльной системе (рис. 19).
Определение количества синтезируемых микроорганизмами витаминов. Витамины, синтезированные микроорганизмами, можно определять в культуральной жидкости, в клетках, отделенных центрифугированием от питательной среды, и в фугате. Фугат используют без какой-либо дополнительной обработки, а клетки предварительно разрушают методом гидролиза или автолиза с целью освобождения витаминов из белковых комплексов и перевода их в раствор.
Подготовка образцов для исследования. Прежде всего получагот автолизат бактериальных клеток. Для этого клетки, полученные центрифугированием культуральной жидкости или собранные с поверхности агаровой среды, высушивают при температуре 40—45°. Навеску сухих клеток разводят водой из расчета 1 : 10 и ставят на автолиз. Для получения автолизата к суспензии прибавляют несколько капель толуола в качестве антисептика для предохранения суспензии от загрязнения посторонней микрофлорой и помещают ее в термостат при температуре 45—48°. Температура выше 50° может привести к инактивации ферментов, вызывающих автолиз клеток. Образцы выдерживают в термостате 3—4 суток, после чего разводят водой до нужной концентрации и используют для определения витаминов.
Гидролизаты клеток готовят следующим образом. Для определения пиридоксина отвешивают на аналитических весах 0,3—0,5 г сухих клеток, приливают к ним 25 мл 0,1 н. H2SO4 и нагревают в течение 45 минут на кипящей водяной бане; затем в мерной колбе доливают гидролизат до 100 мл 0,1 н. NaOH и водой, чтобы рН был 5,5—6,0, фильтруют через бумажный фильтр и разводят водой до нужной концентрации (обычно из расчета 1 г клеток на 3—5 л воды).